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    • 专利摘要:
    本發明係關於抑制非-基因型1之C型肝炎病毒(HCV)NS3-NS4A蛋白酶活性的活性。更特定而言，本發明係關於抑制得自HCV基因型-2或HCV基因型-3之蛋白酶的活性。本發明之方法係使用藉著干擾HCV之生命周期而發揮作用的抑制劑，亦可用來作為抗病毒製劑。本發明更關於組合物，其包括這類化合物，在活體外使用或投與罹患基因型-2或基因型-3HCV感染之患者。本發明亦關於藉著投與包括本發明之化合物的組合物，在患者中治療HCV感染的方法。
    公开号:TW201300108A
    申请号:TW101116449
    申请日:2005-09-30
    公开日:2013-01-01
    发明作者:Chao Lin；William P Taylor
    申请人:Vertex Pharma；
    IPC主号:A61K45-00
    专利说明:
    C型肝炎病毒(HCV)NS3-NS4A蛋白酶抑制劑
    本發明係關於抑制絲胺酸蛋白酶活性，特別是C型肝炎病毒NS3-NS4A蛋白酶之活性的化合物。它們本身藉著干擾C型肝炎病毒之生命周期而發揮作用，亦可用來作為抗病毒製劑。本發明更關於組合物，在活體外使用或投與患有HCV感染的患者。本發明亦關於藉著投與本發明之組合物，在患者中治療HCV感染的方法。
    C型肝炎病毒("HCV")的感染，是強制性的人類醫學問題。認為HCV是大多數非A、非B型肝炎的主因，估計全球的人類血清-盛行率為3%[A. Alberti等人，"C型肝炎的自然史(Natural History of Hepatitis C),"J. Hepatology,31，(附錄1)，第17-24頁(1999)]。僅在美國就有將近4百萬個人被感染[M.J. Alter等人，"病毒性肝炎在美國的流行病學(The Epidemiology of Viral Hepatitis in the United States),Gastroenterol. Clin. North Am.,23,第437-455頁(1994)；M.J. Alter"美國的C型肝炎病毒感染(Hepatitis C Virus Infection in the United States),"J. Hepatology,31，(附錄1)，第88-91頁(1999)]。
    當首次接觸HCV時，僅大約20%被感染的人發展出急性臨床肝炎，而其他人似乎自然地解決了感染。然而，在幾乎70%的案例中，病毒建立了持續十年的慢性感染[S. Iwarson,"慢性肝炎的自然過程(The Natural Course of Chronic Hepatitis),"FEMS Microbiology Reviews,14，第201-204頁(1994)；D. Lavanchy,"C型肝炎的整體監視和控制(Golbal Surveillance and Control of Hepatitis C),"J. Viral Hepatitis,6,第35-47頁(1999)]。這通常導致肝臟炎症的週期性和進行性的惡化，經常導致更嚴重的疾病狀態，如肝硬化和肝細胞癌[M.C. Kew,"C型肝炎與肝細胞癌(Hepatitis C and Hepatocellular Carcinoma)",FEMS Microbiology Reviews,14，第211-220頁(1994)；I. Saito等人，"C型肝炎病毒感染與肝細胞癌的發展有關(Hepatitis C Virus Infection is Associated with the Development of Hepatocellular Carcinoma)",Proc. Natl. Acad. Sci. USA,87，第6547-6549頁(l990)]。不幸的是，對於慢性HCV令人衰弱之進行尚無廣泛有效的治療。
    HCV基因組編碼3010-3033個胺基酸的多蛋白[Q.L. Choo等人，"C型肝炎病毒的遺傳組織化和多樣性(Genetic Organization and Diversity of the Hepatitis C Virus)",Proc. Natl. Acad. Sci. USA,88，第2451-2455頁(1991)；N. Kato等人，"得自患有非A、非B型肝炎之日本患者的人類C型肝炎病毒基因組的分子選殖(Molecular Cloning of the H uMan Hepatitis C Virus Genome From Japanese Patients with Non-A,Non-B Hepatitis)",Proc. Natl. Acad. Sci. USA,87，第9524-9528頁(1990)；A. Takamizawa等人，"分離自人類帶原者之C型肝炎病毒基因組的結構和組織化(Structure and Organization of the Hepatitis C Virus Genome Isolated From H uMan Carriers)",J. Virol.,65，第1105-1113頁(1991)]。推測HCV非結構(NS)蛋白質提供了病毒複製必要的催化機構。藉著多蛋白之蛋白水解切開，衍生NS蛋白質[R. Bartenschlager等人，"C型肝炎病毒之非結構蛋白質3，編碼切開NS3/4和NS4/5接合處所需的絲胺酸-型蛋白酶(Nonstructural Protein 3 of the Hepatitis C Virus Encodes a Serine-Type Proteinase Required for Cleavage at the NS3/4 and NS4/5 Junctions)",J. Virol.,67，第3835-3844頁(1993)；A. Grakoui等人，"C型肝炎病毒編碼之絲胺酸蛋白酶的特徵：判定蛋白酶-依賴性多蛋白的切開位置(Characterization of the Hepatitis C Virus-Encoded Serine Proteinase: Determination of Proteinase-Dependent Polyprotein Cleavage Sites)",J. Virol.,67，第2832-2843頁(1993)；A. Grakoui等人，"C型肝炎病毒多蛋白切開產物的表現和確認(Expression and Identification of Hepatitis C Virus Polyprotein Cleavage Products)",J. Virol.,67，第1385-1395頁(1993)；L. Tomei等人，"NS3是加工C型肝炎病毒多蛋白所需的絲胺酸蛋白酶(NS3 is a serine protease required for processing of hepatitis C virus polyprotein)",J. Virol.,67，第4017-4026頁(1993)]。
    HCV NS蛋白質3(NS3)含有絲胺酸蛋白酶活性，其幫助加工大多數的病毒酵素，並因此認為它對病毒複製和感染是必要的。HCV NS3絲胺酸蛋白酶是病毒複製所必要的，因為在黑猩猩中，該催化三單元組的取代導致喪失感染性[A.A. Kolykhalov等人，"C型肝炎病毒-編碼之酵素活性，以及在3'非轉譯區保存RNA元件，對在活體內之病毒複製是必要的(Hepatitis C virus-encoded enzymatic activities and conserved RNA elements in the 3' nontranslated region are essential for virus replication in vivo)",J. Virol.,74:2046-2051]。已經顯示NS3的前181個胺基酸(病毒多蛋白的殘基1027-1207)含有NS3的絲胺酸蛋白酶功能部位，其加工HCV多蛋白的所有四個下游位置[C. Lin等人，"C型肝炎病毒NS3絲胺酸蛋白酶：反-切開需求和加工動力學(Hepatitis C Virus NS3 Serine Proteinase: Trans-Cleavage Requirements and Processing Kinetics)",J. Virol.,68，第8147-8157頁(1994)]。
    HCV NS3絲胺酸蛋白酶及其關聯輔因子NS4A，幫助加工病毒的非-結構蛋白質區，成為個別的非-結構蛋白質，包括所有的病毒酵素。該加工似乎類似藉著人類免疫缺陷病毒天冬胺醯基蛋白酶所進行的，其亦涉及病毒蛋白質的加工。抑制病毒蛋白質加工的HIV蛋白酶抑制劑，在人類為可能的抗病毒製劑，指出打斷病毒生命周期之該階段，結果成為在治療上有活性的製劑。因此，它是藥物發現的誘人標靶。
    已經在先前技藝中描述了數種有潛力的HCV蛋白酶抑制劑[PCT公開案第WO 02/18369、WO 02/08244、WO 00/09558、WO 00/09543、WO 99/64442、WO 99/07733、WO 99/07734、WO 99/50230、WO 98/46630、WO 98/17679和WO 97/43310號，美國專利第5,990,276號，M. Llinas-Brunet等人，Bioorg. Med. Chem. Lett.,8，第1713-18頁(1998)；W. Han等人，Bioorg. Med. Chem. Lett.,10,711-13(2000)；R. Dunsdon等人，Bioorg. Med. Chem. Lett.,10，第1571-79頁(2000)；M. Llinas-Brunet等人，Bioorg. Med. Chem. Lett.,10，第2267-70頁(2000)；以及S. LaPlante等人，Bioorg. Med. Chem. Lett.,10，第2271-74頁(2000)]。然而，不知道這些化合物是否具有作為可接受藥物的適當輪廓。再者，這些抑制劑中大多數，若不是全部，是利用基因型1(1a或1b)NS3-4A絲胺酸蛋白酶作為標靶而發現的。然而，HCV有各種基因型，而在每種基因型中還有各種亞型。例如，目前已知HCV的11種主要基因型(從1到11編號)，雖然其他人將基因型分成6種主要基因型。這些基因型又可再細分成亞型(1a-1c；2a-2c；3a-3b；4a-4e；5a；6a；7a-7b；8a-8b；9a；10a；和11a)。
    亞型盛行率的全球變化如下：
    目前的科學信念是HCV基因型或亞型可決定患者對治療的反應性。同時，已經注意到在HCV之基因組複雜性與患者對干擾素治療之反應之間的關連，但該關連的理由仍不清楚。通常接受基因型2 HCV和基因型3 HCV病毒-感染的患者，與那些被基因型1 HCV感染的患者，對傳統療法有不同程度的反應。因此，雖然已經設計/發現許多對抗基因型1 HCV蛋白酶的HCV蛋白酶抑制劑，但不清楚這些抑制劑是否將有效地抑制來自其他基因型的HCV NS3-4A絲胺酸蛋白酶，像是例如基因型2 HCV和基因型3 HCV。
    因此，目前對HCV的了解，未曾導致任何令人滿意的抗-HCV製劑或治療。唯一對HCV疾病建立的療法是聚乙二醇化之干擾素加利巴韋林(ribavirin)的組合治療。然而，干擾素具有明顯的副作用[M.A. Wlaker等人，"C型肝炎病毒：目前方法和進展的回顧(Hepatitis C Virus: An overview of Current Approaches and Progress)",DDT,4，第518-29頁(1999)；D. Moradpour等人，"C型肝炎目前和正在發展的療法(Current and Evolving Therapies for Hepatitis C)",Eur. J. Gastroenterol. Hepatol.,11，第1199-1202頁(1999)；H.L.A. Janssen等人，"與慢性病毒性肝炎之α-干擾素療法有關的自殺(Suicide Asscoiated with Alfa-Interferon Therapy for Chronic Viral Hepatitis)",J. Hepatol.,21，第241-243頁(1994)；P.F. Renault等人，"α干擾素的副作用(Side Effects of Alpha Interferon)",Seminars in Liver Disease,9，第273-277頁(1989)]，並僅在部分的案例中(約25%)引起長期的減輕[O. Weiland,"在慢性C型肝炎病毒感染中的干擾素治療(Interferon Therapy in Chronic Hepatitis C Virus Infection)",FEMS Microbiol. Rev.,14，第279-288頁(1994)]。此外，該組合治療對於患有基因型2或3 HCV的患者，約有80%的持續病毒答應率(SVR)，而在基因型1 HCV-感染的患者中約有40-50%的SVR[J.G. McHutchison等人，N. Engl. J. Med.,339:1485-1492(1998)；G.L. Davis等人，N. Engl. J. Med.,339:1493-1499(1998)]。此外，有效抗-HCV疫苗的期望仍不確定。
    因此，對於較有效的抗-HCV療法有需求，特別是抑制HCV NS3蛋白酶的化合物。這類化合物可用來作為抗病毒製劑，特別是抗-HCV製劑。亦對於抑制各種基因型之HCV絲胺酸蛋白酶的化合物有需求。
    本發明藉著提供以VX-950抑制基因型-2和基因型-3 HCV的方法，來處理這些需求。本發明舉例說明VX-950在專一地抑制基因型-2和基因型-3 HCV方面，優於其他蛋白酶抑制劑，預期其他的非-基因型1 HCV之基因型亦可能有利地被VX-950抑制。
    本發明亦關於包括VX-950的組合物，及其用途。可使用這類組合物預先-處理欲插入患者內的侵入性裝置、在投與患者之前先處理生物試樣，如血液，並直接投與患者。在每個案例中，將使用該組合物抑制HCV複製，並減低HCV感染的風險或嚴重性。
    本發明藉著使基因型-2或基因型-3蛋白酶與VX-950接觸，提供單獨或一起抑制基因型-2和基因型-3蛋白酶的方法。
    VX-950是競爭性、可逆的肽模仿物NS3/4A蛋白酶抑制劑，具有3 nM的穩定態結合常數(ki*)(並具有8 nM的Ki)[WO 02/018369]。通常，可藉著熟諳此藝者已知的方法，製備VX-950(參見，例如WO 02/18369)。
    本發明之化合物可含有一或多個不對稱的碳原子，並因此可以消旋物和消旋混合物、單一對映體、非對映異構混合物和個別的非對映異構物存在。特別將所有這些化合物的這類異構形式納入本發明中。每個立體碳可以是R或S組態。
    例如，在某些具體實施例中，所使用的化合物可以是在N-丙基-側鏈處D-和L-異構物的混合物，如同在下列結構中敘述的：
    可針對其作為蛋白酶抑制劑的活性，測試其他經由合理之藥物設計，使用例如VX-950或結構A之化合物作為起始化合物而產生的製劑。
    較佳的是，本發明之化合物具有在VX-950中之化合物中敘述的結構和立體化學。
    本發明其他的具體實施例，提供包括VX-950或其在藥學上可接受之鹽的組合物。根據較佳的具體實施例，VX-950以足以降低在試樣中或在患者中之病毒負荷的量存在，其中該病毒編碼病毒生命周期所需的絲胺酸蛋白酶，以及在藥學上可接受的載劑。
    若在這些組合物中使用本發明化合物之在藥學上可接受的鹽類，那些鹽類最好是衍生自無機或有機酸和鹼。包括在這類酸式鹽中的有：乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環戊烷-丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙烷磺酸鹽、反丁烯二酸、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、氫氯酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙烷磺酸鹽、乳酸鹽、順丁烯二酸鹽、甲烷磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、菸鹼酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酯酸鹽、過二硫酸鹽、3-苯基-丙酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫代氰酸鹽、甲苯磺酸鹽和十一烷酸鹽。鹼式鹽包括銨鹽類、鹼金屬鹽類，如鈉和鉀鹽，鹼土金屬鹽類，如鈣和鎂鹽，帶有有機鹼的鹽類，如二環己胺鹽、N-甲基-D-葡糖胺，以及帶有胺基酸的鹽類，如精胺酸、離胺酸等等。
    再者，可利用諸如低碳數烷基鹵化物，如甲基、乙基、丙基和丁基氯、溴和碘；二烷基硫酸鹽，如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸鹽；長鏈鹵化物，如癸基、月桂基、肉荳蔻基和硬脂醯氯、溴和碘，芳烷基鹵化物，如苄基和苯乙基溴及其他的製劑將鹼性含氮基團四級化。藉此獲得可溶於水或油，或可分散的產物。
    亦可藉著附屬的適當官能性修改本發明組合物和方法中使用的化合物，促進選擇性的生物特性。這類修改是此項技藝中已知的，並包括增加生物滲透至特定生物系統(例如血液、淋巴系統、中樞神經系統)內，增加口服利用性，增加溶解性以便容許藉著注射投藥、改變代謝和改變排泄速率的那些。
    可用在這些組合物中的在藥學上可接受之載劑，包括但不限於離子交換、礬土、硬脂酸鋁、卵磷脂、血清蛋白質，如人類血清白蛋白、緩衝物質，如磷酸鹽、甘胺酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物、水、鹽類或電解質，如硫酸魚精蛋白、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、膠態矽石、三矽酸鎂、聚乙烯吡咯烷酮、以纖維素為基礎之物質、聚乙二醇、羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酸鹽、蠟、聚乙烯-聚氧丙烯區間共聚物、聚乙二醇和羊毛脂。
    根據較佳的具體實施例，為了藥學投與哺乳動物，最好是人類，調配本發明之組合物。
    這類本發明之醫藥組合物可以口服、非經腸、藉著吸入噴霧、局部、經直腸、經鼻、經頰、經陰道或經由植入儲器之方式投藥。當在本文中使用"非經腸"一詞時，包括皮下、靜脈內、肌肉內、動脈內、滑膜內、胸骨內、鞘內、肝內、病竈內和顱內注射或輸液技術。該組合物最好口服或靜脈內投與。
    本發明組合物的無菌注射用形式可以是含水或含油的懸浮液。可根據此項技藝中已知的技術，使用適當的分散或濕潤劑和懸浮劑，來調配這些懸浮液。無菌的注射用製備物也可以是在無毒性非經腸注射用可接受之稀釋劑或溶劑中之無菌的注射用溶液或懸浮液，例如像在1,3-丁二醇中的溶液。在可接受的媒劑和溶劑中，可使用的有水、林格氏液和等張的氯化鈉溶液。此外，在傳統上亦使用無菌的固定油作為溶劑或懸浮介質。為了該目的，可使用任何摻合的固定油，包括合成的單-或二-甘油酯。脂肪酸，如油酸及其甘油酯衍生物，均可用在注射用製備物中，像是天然的在藥學上可接受之油類，如橄欖油或萞麻油，特別是在其聚氧乙烯化的版本中。這些油溶液或懸浮液亦可能含有長鏈醇的稀釋劑或分散劑，如羧甲基纖維素，或在調配在藥學上可接受之劑量形式，包括乳劑和懸浮液時常用的類似分散劑。為了調配之目的，亦可使用其他常用的界面活性劑，如吐溫、斯潘(Spans)，以及其他常用來製造在藥學上可接受之固體、液體或其他劑量形式的乳化劑或生物利用性促進劑。
    在本文中描述之蛋白酶抑制劑化合物，在抗病毒之預防和治療的單一治療中，特別是抗-HCV調解之疾病，使用在大約0.01到大約100毫克/公斤體重每天之間，較佳的是在大約0.5到大約75毫克/公斤體重每天之間的劑量含量。通常，將以每天從大約1到大約5次，或以連續輸液，投與本發明之醫藥組合物。可使用這類投藥作為慢性或急性療法。可與載劑物質混合，產生單一劑量形式之活性成份的量，將視待治療之宿主和特殊之投藥模式而定。代表性的製備物將含有從大約5%到大約95%的活性化合物(重量/重量)。較佳的是，這類製備物含有從大約20%到大約80%的活性化合物。如同熟諳此藝者公認的，通常以國際單位(IU)來測量干擾素的劑量(例如大約4百萬國際單位到大約1千2百萬國際單位)。
    當本發明之組合物包括VX-950與一或多個額外治療或預防劑混合時，化合物和額外製劑兩者均應以在單一治療攝生法中正常投藥之劑量的大約10到100%之間，而更佳的是在大約10到80%之間的劑量含量出現。
    本發明之醫藥組合物，可以任何口服可接受之劑量形式口服投藥，包括但不限於膠囊、錠劑、含水懸浮液或溶液。在口服用錠劑的案例中，常用的載劑包括乳糖和玉米澱粉。通常亦可加入潤滑劑，如硬脂酸鎂。至於膠囊形式的口服投藥，有用的稀釋劑包括乳糖和脫水玉米澱粉。當口服使用需要含水懸浮液時，將活性成分與乳化劑和懸浮劑混合。若需要，亦可加入某些增甜劑、調味或著色劑。
    或者，亦可以經直腸投藥的栓劑形式投與本發明之醫藥組合物。可藉著將該製劑與適當的無刺激性之賦形劑混合來製備這些，該賦形劑在室溫下為固體，但在直腸溫度下為液體，並因此將在直腸中融化而釋放藥物。這類材料包括可可脂、蜂蠟和聚乙二醇。
    亦可局部投與本發明之醫藥組合物，尤其是在治療標靶包括藉著局部施用可輕易接近的地方或器官時，包括眼睛、皮膚或下腸道的疾病。可輕易地製備分別適合這些地方或器官的適當局部調配物。
    下腸道的局部應用，可利用直腸栓劑調配物(參見上文)或以適當的灌腸調配物完成。亦可使用局部-經皮貼片。
    至於局部塗抹，可將醫藥組合物調配成適當的軟膏，其含有懸浮或溶解於一或多個載劑中的活性組份。適合本發明化合物之局部投藥用的載劑，包括但不限於礦物油、液態凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蠟和水。或者，可將醫藥組合物調配成適當的洗劑或乳霜，其含有懸浮或溶解於一或多個在藥學上可接受之載劑中的活性組份。適當之載劑包括，但不限於礦物油、脫水山梨糖醇單硬脂酸酯、多乙氧基醚60、鯨蠟酯蠟、鯨蠟醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。
    至於眼科用途，可將醫藥組合物調配成在等張的、調整過pH值之無菌生理鹽水中的微粒化懸浮液，或較佳的是，成為在等張的、調整過pH值之無菌生理鹽水中的溶液，有或無防腐劑，如苯札氯銨。或者，對於眼科應用，可將醫藥組合物調配成軟膏，如凡士林。
    本發明之醫藥組合物亦可藉著鼻用氣溶膠或吸入投藥。根據在藥學調配技藝中已熟知的技術，製備這類組合物，並可製備成在生理鹽水中的溶液，使用苯甲醇或其他適當的防腐劑、增加生物利用性的吸收促進劑、碳氟化合物及/或其他傳統的促溶或分散劑。
    最佳的是，為了口服投藥而調配的醫藥組合物。
    在其他的具體實施例中，本發明之組合物可額外地包括其他抗-病毒製劑，最好是抗-HCV製劑。這類抗-病毒製劑包括，但不限於免疫調節劑，如α-、β-和γ-干擾素、聚乙二醇化衍生的干擾素-α化合物和胸腺素；其他的抗-病毒製劑，如利巴韋林、金剛烷胺(amantadine)和汰比夫定(telbivudine)；其他的C型肝炎蛋白酶抑制劑(NS2-NS3抑制劑和NS3-NS4A抑制劑)；在HCV生命周期中之其他標靶的抑制劑，包括解螺旋酶和聚合酶抑制劑；內部核糖體進入的抑制劑；廣效的病毒抑制劑，如IMPDH抑制劑(例如美國專利第5,807,876號、6,498,178號、6,344,465號、6,054,472號、WO 97/40028、WO 98/40381、WO 00/56331的化合物，以及黴酚酸及其衍生物，並包括但不限於VX-497、VX-148及/或VX-944)；或任何上文的組合。亦參見W. Markland等人，Antimicrobial & Antiviral Chemotherapy,44，第859頁(2000)和美國專利第6,541,496號。
    在本文中使用下列的定義(商標意指可以該申請案之建檔資料獲得產物)。
    "佩樂能(Peg-Intron)"意指佩樂，聚乙二醇干擾素α-2b，獲自Schering Corporation,Kenilworth,NJ；"甘樂能(Intron)"意指甘樂能-，干擾素α-2b，獲自Schering Corporation,Kenilworth,NJ；"利巴韋林"意指利巴韋林(1-β-D-呋喃核糖基-1H-1,2,4-三唑-3-羧醯胺，獲自ICN Pharmaceuticals,Inc.,Costa Mesa,CA；在Merck Index，8365項，第12版中描述；亦可以獲自Schering Corporation,Kenilworth,NJ，或以獲自Hoffmann-La Roche,Nutley,NJ；"派羅欣(Pagasys)"意指派羅，聚乙二醇干擾素α-2a，獲自Hoffmann-La Roche,Nutley,NJ；"力度伸(Roferon)"意指力度，重組的干擾素α-2a，獲自Hoffmann-La Roche,Nutley,NJ；"伯瑞福(Berefor)"意指伯瑞，干擾素α2，獲自Boehringer Ingelheim Pharmaceutical,Inc.,Ridgefield,CT；蘇米福，天然α干擾素的經過純化之摻合物，如獲自Sumitomo,Japan的蘇米福；惠福仁，干擾素αnl，獲自Glaxo_Wellcome Ltd.,Graet Britain；阿福倫，由Interferon Sciences製造的天然α干擾素之混合物，並獲自Purdue Frederick Co.,CT；"干擾素"一詞，當在本文中使用時，意指高度同種性之物種專一性蛋白質家族的成員，其抑制病毒複製和細胞增殖，並調節免疫反應，如干擾素α、干擾素β或干擾素γ。The Merck Index，5015項，第12版。
    根據本發明的一個具體實施例，該干擾素為α干擾素。根據另一個具體實施例，本發明之治療組合物利用天然的α干擾素2a。或者，本發明之治療組合物利用天然的α干擾素2b。在另一個具體實施例中，本發明之治療組合物利用重組的α干擾素2a或2b。在另一個具體實施例中，該干擾素是聚乙二醇化的α干擾素2a或2b。適合本發明的干擾素包括：
    (a)甘樂能(干擾素-α2B，Schering Plough)，
    (b)佩樂能，
    (c)派羅欣，
    (d)力度伸，
    (e)伯瑞福，
    (f)蘇米福，
    (g)惠福仁，
    (h)獲自Amgen,Inc.,Newbury Park,CA的一致α干擾素，
    (i)阿福倫；
    (j)菲瑞福；
    (k)幹復津。
    如同熟諳此藝者公認的，最好口服投與蛋白酶抑制劑。干擾素通常不是以口服投與。儘管如此，在本文中對本發明之方法或組合物，並未限於特定的劑量形式或攝生法。因此，可分別、一起或以其任何組合投與根據本發明之組合物的每個組份。
    在一個具體實施例中，以分開的劑量形式投與蛋白酶抑制劑和干擾素。在一個具體實施例中，以帶有蛋白酶抑制劑之單一劑量形式的一部份，或以分開的劑量形式，投與任何額外的製劑。因為本發明涉及化合物的組合，每個化合物的特定量可視在該組合物中每個其他化合物的特定量而定。如同熟諳此藝者公認的，通常以IU測量干擾素的劑量(例如大約4百萬IU至大約1千2百萬IU)。
    因此，可在連同本發明化合物之組合物中使用的製劑(無論是擔任免疫調節劑或其他)，包括但不限於干擾素-α2B(甘樂能A，Schering Plough)；雷貝春(Rebatron)(Schering Plough,干擾素α2B+利巴韋林)；聚乙二醇化之干擾素α(Reddy,K.R.等人，"在患有慢性C型肝炎之非肝硬化的患者中，與干擾素α-2a相比較，聚乙二醇化(40-kd)之干擾素α-2a的效力和安全性(Efficacy and Safety of Pegylated(40-kd) interferon alpha-2a compared with interferon alpha-2a in noncirrhotic patients with chronic hepatitis C)" Hepatology,33，第433-438頁(2001))；一致的干擾素(Kao,J.H.等人，"一致干擾素在慢性肝炎之治療上的效力(Efficacy of Consensus Interferon in the Treatment of Chronic Hepatitis)" J. Gastroenterol. Hepatol. 15，第1418-1423頁(2000))；干擾素-α2A(力度伸A；Roche)，類淋巴母細胞系或"天然的"干擾素；干擾素τ(Clayette,P.等人，"IFN-τ，一種具有抗逆轉錄病毒活性的新穎干擾素第I型(IFN-tau,A New Interferon Type I with Antiretroviral activity)" Pathol. Biol.(PariS) 47，第553-559頁(1999))；介白素2(Davis,G.L.等人，"管理C型肝炎的未來選擇(Future Options for the Management of Hepatitis C)" Seminars in Liver Disease,19，第103-112頁(1999))；介白素6(Davis等人，"管理C型肝炎的未來選擇(Future Options for the Management of Hepatitis C)" Seminars in Liver Disease,19，第103-112頁(1999))；介白素12(Davis等人，"管理C型肝炎的未來選擇(Future Options for the Management of Hepatitis C)" Seminars in Liver Disease,19，第103-112頁(1999))；利巴韋林；以及提高第1型協助者T細胞反應之發展的化合物(Davis等人，"管理C型肝炎的未來選擇(Future Options for the Management of Hepatitis C)" Seminars in Liver Disease,19，第103-112頁(1999))。干擾素可藉著直接發揮抗病毒效力及/或藉著修改對感染的免疫反應，而改善病毒感染。通常經由抑制病毒貫穿或脫殼、病毒RNA的合成、病毒蛋白質的轉譯，及/或病毒的組裝和釋放，來調解干擾素的抗病毒效力。
    在細胞中刺激干擾素合成的化合物(Tazulakhova,E.B.等人，"新穎干擾素誘導物之篩選、分析和臨床應用的俄國實驗(Russian Experience in Screening,analysis,and Clinical Application of Novel Interferon Inducers)",J. Interferon Cytokine Res.,21，第65-73頁)，包括但不限於雙股的RNA，單獨或與托普黴素併用，以及咪喹莫特(Imiquimod)(3M Pharmaceuticals;Sauder,D.N."咪喹莫特的免疫調節和藥理學特性(Immunomodulatory and Pharmacologic Properties of Imiquimod)" J. Am. Acad. Dermatol.,43，第S6-11頁(2000))。
    其他可與本發明化合物併用的非-免疫調節或免疫調節化合物，包括但不限於在WO 02/18369中指定的，以引用的方式併入本文中(參見，例如第273頁第9-22行，以及第274頁第4行至第276頁第11行，全部以引用的方式併入本文中)。
    在細胞中刺激干擾素合成的化合物(Tazulakhova等人，J. Interferon Cytokine Res. 21,65-73)，包括但不限於雙股的RNA，單獨或與托普黴素和咪喹莫特(Imiquimod)(3M Pharmaceuticals;Sauder,D.N."咪喹莫特的免疫調節和藥理學特性(Immunomodulatory and Pharmacologic Properties of Imiquimod)"J. Am. Acad. Dermatol.,43，第S6-11頁(2000))併用。
    其他已知憑藉著非-免疫調解機制，而具有或可能具有HCV抗病毒活性的化合物，包括但不限於利巴韋林(ICN Pharmaceuticals)；肌苷5'-單磷酸脫氫酶抑制劑(在本文中提供的VX-497化學式)；金剛烷胺和金剛乙胺(rimantadine)(Younossi等人，In Seminars in Liver Disease 19,95-102(1999))；LY217896(美國專利第4,835,168號)(Colacino等人，Antimicrobial Agents & Chemotherapy 34,2156-2163(1990))；以及9-羥亞胺基-6-甲氧基-1,4a-二甲基1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氫-菲-1-羧酸甲酯；6-甲氧基-1,4a二甲基-9-(4-甲基-六氫吡肼-1-基亞胺基)-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氫-菲-1-羧酸甲酯-鹽酸鹽；1-(2-氯-苯基)-3-(2,2-二苯基-乙基)-脲(美國專利第6,127,422號)。在下面提及的參考文獻中，教導前述分子的調配、劑量和投藥路徑，或為此項技藝中已熟知的，例如在F.G. Hayden,Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics，第9版，Hardman等人編輯，McGraw-Hill,New York(1996)，第50章，第1191-1223頁中，以及在其中提及之參考文獻中揭示。或者，一旦已經確認一化合物顯示出HCV抗病毒活性，便可使用熟諳此藝者已熟知的技術，判定該化合物在藥學上有效的含量。註解，例如Benet等人，在Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics，第9版，Hardman等人編輯，McGraw-Hill,New York(1996)，第1章，第3-27頁，以及其中提及的參考文獻。因此，可藉著例行的方法輕易地判定這類化合物適當的調配物、劑量範圍和給藥攝生法。可以同時或分開投與之個別的在藥學上可接受之調配物、含有一種以上治療劑的調配物，或藉著單一製劑和多重製劑調配物的組合，將本發明之藥物組合提供給一個細胞或細胞群，或提供給人類患者。無論投藥路徑為何，這些藥物組合形成有效抗-HCV之含量的組份。可在本發明之方法中使用許多其他的免疫調節劑和免疫刺激劑，目前可獲得的包括：AA-2G；金剛基(adamantyl)醯胺二肽；腺苷脫胺酶；安榮(Enzon)佐劑,Alliance；佐劑，Ribi；佐劑，Vaxcel；阿德菲克斯(Adjuvax)；阿吉拉芬(agelasphin)-11；AIDS療法，Chiron；藻醣(algal glucan)，SRI；藻努林(alganunulin),Anutech；紅寶方(Anginlyc)；抗細胞因子，Yeda；抗寇特(Anticort)；抗-促胃酸激素(antigastrin)-17免疫原，AP；抗原遞送系統,Vac；抗原調配物,IDBC；抗GnRH免疫原，Aphton；安特賀平(Antiherpin)；阿比朵爾(Arbidol)；(azarole)；Bay-q-8939；Bay-r-1005；BCH-1393；貝他菲汀(Betafectin)；必思添(Biostim)；BL-001；BL-009；彭克斯塔(Broncostat)；肯塔斯汀(Cantastim)；CDRI-84-246；頭孢地秦(cefodizime)；化學激動素抑制劑,ICOS；CMV肽,City of Hope；CN-5888；細胞激動素-釋放劑，St；DHEAS,Paradigm；DISC TA-HSV；J07B；I01A；I01Z；二硫卡鈉(ditiocarb sodium)；ECA-10-142；ELS-1；內毒素，Novartis；FCE-20696；FCE-24089；FCE-24578；FLT-3配體,Immunex；FR-900483；FR-900494；FR-901235；FTS-Zn；G-蛋白質,Cadus；格魯達欣(gludapcin)；磺乙穀醯胺(glutaurine)；甘磷酸肽(glycophosphopeptical)；GM-2；GM-53；GMDP；生長因子疫苗,EntreM；H-BIG,NABI；H-CIG,NABI；HAB-439；幽門螺桿菌疫苗；疱疹-專一性的免疫因子；HIV療法，United Biomed；HyperGAM+CF；依莫美克斯(Immumax)；依莫BCG(Immun BCG)；免疫療法，Connective；免疫調節劑,Evans；免疫調節劑，Novacell；因瑞格(imreg)-1；因瑞格-2；印多莫(Indomune)；異丙肌苷(inosine pranobex)；干擾素，Dong-A(α2)；干擾素，Genentech(γ)；干擾素，Novartis(α)；介白素-12，Genetics Ins；介白素-15,Immunex；介白素-16,Research Cor；ISCAR-1；J005X；L-644257；林可馬拉酸(licomarasminic acid)；LipoTher；LK-409；LK-410；LP-2307；LT(R1926)；LW-50020；MAF,Shionogi；MDP衍生物,Merck；甲硫胺酸-腦啡肽(met-enkephalin),TNI；甲基呋喃基丁內酯；MIMP；米立司亭(mirimostim)；混合的細菌疫苗，Tem,MM-1；莫尼利斯塔(moniliastat)；MPLA,Ribi；MS-705；莫拉丁酯(murabutide)；馬拉丁酯(marabutide),Vacsyn；胞壁醯基二肽衍生物；胞壁醯基肽衍生物骨髓肽(myelopid)；-563；NACOS-6；NH-765；NISV,ProteuS；NPT-16416；N T-002；PA-485；PEFA-814；肽，Scios；肽聚糖,Pliva；普松(Perthon),Advanced Plant；PGM衍生物,Pliva；Pharmaprojects第1099期；1426期；1549期；1585期；1607期；1710期；1779期；2002期；2060期；2795期；3088期；3111期；3345期；3467期；3668期；3998期；3999期；4089期；4188期；4451期；4500期；4689期；4833期；494期；5217期；530期；匹多莫(pidotimod)；匹美勞肽(pimelautide)；吡萘非特(pinafide)；PMD-589；鬼臼毒素(podophyllotoxin),Conpharm；POL-509；聚-ICLC；聚-ICLC,Yamasa Shoyu；聚A-聚U；多醣A；蛋白質A,Berlux Bioscience；PS34WO；假單孢菌MAbs,Teijin；普索瑪賓(Psomaglobin)；PTL-78419；派雷索(Pyrexol)；派雷菲榮(pyriferone)；瑞佐根(Retrogen)；瑞佐派普(Retropep)；RG-003；如諾斯特(Rhinostat)；瑞法馬克(rifamaxil)；RM-06；若林(Rollin)；羅莫肽(romurtide)；RU-40555；RU-41821；風疹抗體，ResCo；S-27649；SB-73；SDZ-280-636；SDZ-MRL953；SK&F-107647；SL04；SL05；SM-4333；水溶性免疫球蛋白(Solutein)；SRI-62-834；SRL-172；ST-570；ST-789；斯塔菲格(staphage)溶胞產物；刺激子(Stimulon)；抑制素(suppressin)；T-150R1；T-LCEF；他比勞肽(tabilautide)；替莫肽(temurtide)；多肽疫苗(Theradigm)-HBV；多肽疫苗(Theradigm)-HBV；多肽疫苗(Theradigm)-HSV；THF,Pharm & Upjohn；THF,Yeda；胸腺法新(thymalfasin)；胸腺激素片段；胸腺卡汀(thymocartin)；胸腺淋巴促進素(thymolymphotropin)；胸腺五肽(thymopentin)；胸腺五肽類似物；胸腺五肽,Peptech；胸腺素片段5,Alpha；胸腺刺激素(thymostimulin)；胸腺曲南(thymotrinan)；TMD-232；TO-115；轉移因子，Viragen；巨噬作用激素(tuftsin),Selavo；烏苯美司(ubenimex)；烏沙史塔(Ulsastat)；ANGG-；CD-4+；Collag+；COLSF+；COM+；DA-A+；GAST-；GF-TH+；GP-120-；IF+；IF-A+；IF-A-2+；IF-B+；IF-G+；IF-G-1B+；IL-2+；IL-12+；IL-15+；IM+；LHRH-；LIPCOR+L LYM-B+；LYM-NK+；LYM-T+；OPI+；PEP+；PHG-MA+；RNA-SYN-；SY-CW-；TH-A-I+；TH-5+；TNF-；UN。
    可用在本發明中之代表性的核苷和核苷酸，包括但不限於：(+)-順-5-氟-1-[2-(羥基-甲基)-[1,3-氧雜硫(oxathiolan)-5-基]胞嘧啶；(-)-2'-脫氧-3'-硫代胞嘧啶核苷-5'-三磷酸(3TC)；(-)-順-5-氟-1-[2-(羥基-甲基)-[1,3-氧雜硫-5-基]胞嘧啶(FTC)；(-)-2',3'-二脫氧-3'-硫代胞嘧啶核苷[(-)-SddC]；1-(2'-脫氧-2'-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-碘胞嘧啶(FIAC)；1-(2'-脫氧-2'-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-碘胞嘧啶三磷酸(FIACTP)；1-(2'-脫氧-2'-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-甲基尿嘧啶(FMAU)；1-β-D-呋喃核糖基-1,2,4-三唑-3-羧醯胺；2',3'-二脫氧-3'-氟-5-甲基-右旋(dexo)胞嘧啶核苷(FddMeCyt)；2',3'-二脫氧-3'-氯-5-甲基-右旋胞嘧啶核苷(ClddMeCyt)；2',3'-二脫氧-3'-胺基-5-甲基-右旋胞嘧啶核苷(AddMeCyt)；2',3'-二脫氧-3'-氟-5-甲基-胞嘧啶核苷(FddMeCyt)；2',3'-二脫氧-3'-氯-5-甲基-胞嘧啶核苷(ClddMeCyt)；2',3'-二脫氧-3'-胺基-5-甲基-胞嘧啶核苷(AddMeCyt)；2',3'-二脫氧-3'-氟胸腺核苷(FddThd)；2',3'-二脫氧-β-L-5-氟胞嘧啶核苷(β-L-FddC)；2',3'-二脫氧-β-L-5-硫代胞嘧啶核苷；2',3'-二脫氧-β-L-5-胞嘧啶核苷(β-L-ddC)；9-(1,3-羥基-2-丙氧甲基)鳥嘌呤；2'-脫氧-3'-噻-5-氟胞嘧啶；3'-胺基-5-甲基-右旋胞嘧啶核苷(AddMeCyt)；2-胺基-1,9-[(2-羥甲基-1-(羥甲基)乙氧基]甲基]-6H-6-羥基嘌呤(更昔洛韋(ganciclovir))；2-[2-(2-胺基-9H-嘌呤-9-基)乙基]-1,3-丙二醇二乙酸鹽(泛昔洛韋(famciclovir))；2-胺基-1,9-二氫-9-[(2-羥基-乙氧基)甲基]6H-6-羥基嘌呤(阿昔洛韋(acyclovir))；9-(4-羥基-3-羥甲基-丁-1-基)鳥嘌呤(噴昔洛韋(penciclovir))；9-(4-羥基-3-羥甲基-丁-1-基)-6-脫氧-鳥嘌呤二乙酸鹽(泛昔洛韋)；3'-疊氮基-3'-脫氧胸腺核苷(AZT)；3'-氯-5-甲基-右旋胞嘧啶核苷(ClddMeCyt)；9-(2-膦醯基-甲氧乙基)-2',6'-二胺基嘌呤-2',3'-二脫氧核糖核苷；9-(2-膦醯基甲氧乙基)腺嘌呤(PMEA)；阿昔洛韋三磷酸鹽(ACVTP)；D-碳環-2'-脫氧鳥嘌呤核苷(CdG)；二脫氧-胞嘧啶核苷；二脫氧-胞嘧啶(ddC)；二脫氧-鳥嘌呤(ddG)；二脫氧-肌苷(ddI)；E-5-(2-溴乙烯基)-2'-脫氧尿嘧啶核苷三磷酸鹽；氟-阿拉伯呋喃糖基-碘尿嘧啶；1-(2'-脫氧-2'-氟-1-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-碘-尿嘧啶(FIAU)；司他伏定(stavudine)；9-β-D-阿拉伯呋喃糖基-9H-嘌呤-6-胺單水合物(Ara-A)；9-β-D-阿拉伯呋喃糖基-9H-嘌呤-6-安-5'-單磷酸鹽單水合物(Ara-AMP)；2-脫氧-3'-噻-5-氟胞嘧啶核苷；2',3'-二脫氧-鳥嘌呤，以及2',3'-二脫氧-鳥嘌呤核苷。
    製備在本發明中使用之核苷和核苷酸的合成方法是此項技藝中已熟知的，如同在Acta Biochim Pol.,43,25-36(1996)；Swad. Nucleosides Nucleotides 15,361-378(1996)；Synthesis 12,1465-1479(1995)；Carbohyd. Chem. 27,242-276(1995)；Chena Nucleosides Nucleotides 3,421-535(1994)；Ann. Reports in Med. Chena,Academic Press以及Exp. Opin. Invest. Drugs 4,95-115(1995)中揭示的。從其製備本發明化合物之最廣泛應用的觀點來看，廣泛地揭示在上文提及之參考文獻中描述的化學反應。有時，反應可能不適合用來描述每個納入在本文中揭示之化合物範圍內的化合物。將由熟諳此藝者輕易地認出發生該情況的化合物。在所有這類的案例中，可藉著熟諳此藝者已知的傳統修改順利地進行反應，例如藉著適當地保護干擾的基團、藉著更換另一種傳統的試劑、藉著例行地修改反應條件，及其類似者，或其他在本文中揭示的反應或另類傳統反應將適合用來製備本發明的對應化合物。在所有的製備方法中，所有的起始物質均是已知的，或是可從已知之起始物質迅速製備的。通常將使用核苷類似物作為抗病毒製劑，有時必須將核苷酸(核苷磷酸鹽)轉變為核苷，而有助於將其運送通過細胞膜。一個以化學方式修改，而能夠進入細胞之核苷酸的實例為S-1-3-羥基-2-膦醯基甲氧丙基胞嘧啶(HPMPC,Gilead Sciences)。在本發明中使用的核苷和核苷酸化合物，是能夠形成鹽類的酸。實例包括帶有鹼金屬或鹼土金屬，如鈉、鉀、鈣或鎂，或帶有有機鹼的鹽類，或鹼性四級銨鹽。
    本發明亦可涉及投與細胞色素P450雙功能加氧酶抑制劑。CYP抑制劑可用來增加被CYP抑制之化合物的肝臟濃度及/或增加其血液濃度。
    若本發明之具體實施例涉及CYP抑制劑，便可在本發明之方法中使用任何改善相關NS3/4A蛋白酶之藥物動力學的CYP抑制劑。這些CYP抑制劑包括但不限於利托納維(ritonavir)(WO 94/14436)、酮康唑(ketoconazole)、醋竹桃黴素(troleandomycin)、4-甲基吡唑、環孢靈、氯美噻唑(clomethiazole)、西咪替丁(cimetidine)、伊曲康唑(itraconazole)、氟康唑(fluconazole)、咪康唑(miconazole)、氟伏沙明(fluvoxamine)、氟西汀(fluoxetine)、萘法唑酮(nefazodone)、舍曲林(sertraline)、英地納維(indinavir)、奈非那韋(nelfinavir)、安普那韋(amprenavir)、佛薩普那韋(fosamprenavir)、沙奎那維(saquinavir)、洛匹那韋(lopinavir)、地拉維定(delavirdine)、紅黴素、VX-944和VX-497。較佳的CYP抑制劑包括利托納維、酮康唑、醋竹桃黴素、4-甲基吡唑、環孢靈和氯美噻唑。至於利托納維的較佳劑量形式，參見美國專利第6,037,157號，以及在其中提及的文獻：美國專利第5,484,801號，美國專利申請案08/402,690，以及國際申請案WO 95/07696和WO 95/09614。
    測量化合物抑制細胞色素P450雙功能加氧酶活性之能力的方法是已知的(參見美國專利第6,037,157號，以及Yun等人Drug Metabolism & Disposition，第21冊，第403-407頁(1993))。
    可以低於在此項技藝中之那些傳統用量的量，投與在本發明之混合療法中使用的免疫調節劑、免疫刺激劑和其他製劑。例如，通常以從大約1x106單位/人每週三次到大約10x106單位/人每週三次的量，將干擾素α投與人類來治療HCV感染(Simon等人，Hepatology 25:445-448(1997))。在本發明之方法和組合物中，該劑量可以在從約0.1x106單位/人每週三次到大約7.5x106單位/人每週三次的範圍內；較佳的是從大約0.5x106單位/人每週三次到大約5x106單位/人每週三次；最好是從大約1x106單位/人每週三次到大約3x106單位/人每週三次。因為在本發明之HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑的存在下，提高了免疫調節劑、免疫刺激劑或其他抗-HCV製劑的C型肝炎病毒抗病毒效力，故可在本文期待之治療方法和組合物中，使用降低含量的這些免疫調節劑/免疫刺激劑。同樣地，因為在免疫調節劑和免疫刺激劑的存在下，提高了本發明之HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑的C型肝炎病毒抗病毒效力，故可在本文期待之方法和組合物中，使用降低含量的這些HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑。可藉著在接受治療之被感染的患者中，例行地監視C型肝炎病毒力價，決定這類的降低含量。這可藉著，例如，藉著狹縫(slot-blot)、點(dot-blot)或RT-PCR技術監視患者血清中的HCV RNA，或藉著測量HCV表面或其他抗原來完成。可在使用在本文中揭示之HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑和其他具有抗-HCV活性之化合物，例如核苷及/或核苷酸抗病毒製劑的混合治療期間，以類似方式監視患者，判定在混合使用時每個製劑的最低有效劑量。
    在本文中揭示之混合治療方法中，核苷或核苷酸抗病毒化合物，或其混合物，可以範圍從大約0.1毫克/人/天到大約500毫克/人/天的量投與人類；較佳的是從大約10毫克/人/天到大約300毫克/人/天；更佳的是從大約25毫克/人/天到大約200毫克/人/天；再更佳的是從大約50毫克/人/天到大約150毫克/人/天；而最佳的是在從大約1毫克/人/天到大約50毫克/人/天的範圍內。
    可以單一劑量或以成比例的劑量，將化合物之劑量投與患者。在後者的案例中，劑量單位組合物可含有這類含量的幾分之一，組成每日劑量。每天多個劑量亦可增加總每日劑量，這應該是開藥方的人想要的。
    根據各種因素，包括患者的年齡、體重、性別、飲食和醫學狀況、感染的嚴重性、投藥路徑、藥理學考量，如所使用之特定化合物的活性、效力、藥物動力學和毒物學輪廓，以及是否使用藥物遞送系統，來選擇以本發明之化合物及/或組合物治療患有HCV感染之患者的攝生法。投與在本文中揭示之藥物組合物，通常應持續數週至數個月或年，直到病毒力價達到可接受的程度，表示感染已受到控制或被撲滅為止。可藉著以狹縫、點或RT-PCR技術測量患者血清中的肝炎病毒RNA，或藉著測量血清中的C型肝炎病毒抗原，如表面抗原，例行地監視經歷在本文中揭示之藥物組合治療的患者，判定治療的效力。持續分析藉著這些方法獲得的數據，容許在治療期間修改治療攝生法，而得以投與在該組合中每種組份的最佳用量，並可判定最佳的治療期間。因此，可在治療過程中合理地修改治療攝生法/給藥計畫，而得以投與在該組合中所使用之每種抗病毒化合物的最低用量，其一起顯示出令人滿意的抗-C型肝炎病毒效力，並僅持續投與在組合中的這類抗病毒化合物，只要其對於成功治療感染是必要的。
    本發明包括在帶有前述和類似類型之具有抗-HCV活性之化合物的各種組合中，在本文中揭示之HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑治療或預防患者之HCV感染的用途。例如，一或多個HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑可用來與下列的混合：一或多個具有抗-HCV活性之干擾素或干擾素衍生物；一或多個具有抗-HCV活性的非-干擾素化合物；或一或多個具有抗-HCV活性之干擾素或干擾素衍生物和一或多個具有抗-HCV活性之非-干擾素化合物。當混合使用來治療或預防人類患者的HCV感染時，任何目前揭示的HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑和前述的具有抗-HCV活性之化合物，均可以在藥學上或抗-HCV有效的含量存在。由於其加成或協同作用，當在上述的組合中使用時，亦均可以亞臨床的在藥學上有效的或抗-HCV有效的量存在，即該用量若單獨使用，與當以在藥學上有效之含量使用的這類HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑和具有抗-HCV活性之化合物時相比較，在患者中完全抑制或降低HCV病毒粒子的累積及/或降低或改善與HCV感染或發病有關之狀況或症狀方面，提供降低了的藥學效力。此外，本發明亦包括HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑與上述具有抗-HCV活性之化合物之組合，在治療或預防HCV感染上的用途，由於其加成或協同作用，這些抑制劑或化合物中的一或多個，是以在藥學上有效之含量存在，而其他的則是以亞臨床的在藥學上有效的或抗-HCV有效的含量存在。當在本文中使用時，"加成作用"一詞描述二(或多)種具有藥學活性之製劑的混合效力，等於單獨給予任一製劑之效力的總和。協同作用則是二(或多)種具有藥學活性之製劑的混合效力，大於單獨給予任一製劑之效力的總和。
    當患者的狀況改善時，若需要可投與本發明之化合物、組合物或組合的維持劑量。隨後可按症狀之函數，降低投藥的劑量或頻率或兩者，至維持改善狀況的程度，當症狀已經減輕至想要的程度時，應停止治療。然而，當任何疾病症狀再發時，患者可能需要長期的間歇治療。
    亦應了解對於任何特殊患者的特定劑量和治療攝生法，將視各種因素而定，包括所使用之特定化合物的活性、年齡、體重、一般健康、性別、飲食、投藥時間、排泄速率、藥物組合和臨床醫師的判斷，以及待治療之特殊疾病的嚴重性。活性成份的量亦將視特別描述的化合物，以及在組合物中其他抗病毒製劑的存在或缺乏及性質而定。
    根據其他的具體實施例，本發明藉著對該患者投與本發明之在藥學上可接受的組合物，提供治療被病毒感染之患者的方法，該病毒之特徵在於病毒編碼之絲胺酸蛋白酶為該病毒生命周期所必需的。較佳的是，使用本發明之方法來治療患有HCV感染的患者。這類治療可完全撲滅病毒感染，或降低其嚴重性。該患者最好是人類。
    在另一個具體實施例中，本發明之方法額外地包括對該患者投與抗-病毒製劑，較佳的是抗-HCV製劑的步驟。這類抗-病毒製劑包括，但不限於免疫調節劑，如α-、β-和γ-干擾素、聚乙二醇化衍生的干擾素-α化合物和胸腺素；其他的抗病毒製劑，如利巴韋林和金剛烷胺；其他的C型肝炎蛋白酶抑制劑(NS2-NS3抑制劑和NS3-NS4A抑制劑；在HCV生命周期中其他標靶的抑制劑，包括解螺旋酶和聚合酶抑制劑；內部核糖體進入的抑制劑；廣效性病毒抑制劑，如IMPDH抑制劑(在美國專利第5,807,876號中揭示的IMPDH抑制劑、黴酚酸及其衍生物)；或任何上述的組合。
    這類額外的製劑，可以包括本發明之化合物和其他抗病毒製劑之單一劑量形式的一部分投與該患者。或者，可將該額外製劑與本發明之化合物分開，以多重劑量形式的一部分來投與，其中該額外製劑係在投與本發明化合物之前、一起或之後投與。
    在本發明另一個具體實施例中，提供預先處理意欲投與患者之生物物質的方法，包括使該生物物質與包括本發明化合物之在藥學上可接受之組合物接觸的步驟。這類生物物質包括但不限於血液及其組份，如血漿、血小板、血液細胞的亞族群及其類似物；器官，如腎臟、肝臟、心臟、肺等等；精子和卵；骨髓及其組份，以及其他欲輸液至患者內的液體，如生理鹽水、右旋糖等等。
    根據本發明其他的具體實施例，提供處理有可能與病毒接觸之材料的方法，該病毒之特徵在於病毒編碼之絲胺酸蛋白酶對其生命周期是必要的。該方法包括使該材料與根據本發明之化合物接觸的步驟。這類材料包括但不限於手術器具和服裝(例如衣服、手套、圍裙、手術服、口罩、眼鏡、鞋靴等等)；實驗室儀器和服裝(例如衣服、手套、圍裙、手術服、口罩、眼鏡、鞋靴等等)；血液收集裝置和材料；以及侵入性裝置，如分流器(shunts)、血管支架等等。
    在其他的具體實施例中，本發明化合物亦可用來作為實驗室工具，幫助分離病毒編碼的絲胺酸蛋白酶。該方法包括提供與固體支撐物附接的本發明化合物；使該固體支撐物在引起該蛋白酶與該固體支撐物結合的條件下與含有病毒絲胺酸蛋白酶的試樣接觸；並從該固體支撐物中洗脫出該絲胺酸蛋白酶的步驟。藉著該方法分離之病毒絲胺酸蛋白酶最好是HCV NS3-NS4A蛋白酶。
    為了更充分地了解本發明，陳述下列的製備和測試實例。這些實例僅為了解釋之目的，並非企圖以任何方式限制本發明之範圍。 實例
    下列的實例提供較佳的具體實施例與技術，但並非企圖加以限制。從本發明之揭示內容的觀點來看，熟諳此藝者將知曉可在其揭示之特定的材料和方法中進行許多改變，且將獲得類似或相同的結果，這不違背本發明之精神和範圍。 實例1HCV NS3蛋白酶HPLC肽切開測定
    該測定是Landro等人描述[Landro J.A.等人，Biochemistry,36，第9340-9348頁(1997)]的修改。所有的蛋白酶均使用以基因型1a HCV之NS5A/NS5B切開位置為基礎的單一肽受質(NS5AB)。在含有0.2 M DTT的DMSO中製備受質母液(25 mM)，並儲存在-20℃下。使用適合每個基因型的合成肽輔因子(KK4A)，取代NS4A的中央核心區。下文出示肽序列。以96-孔微量滴定盤之格式進行水解反應，使用在含有50 mM HEPES pH7.8,100 mM NaCl,20%甘油,5 mM DTT和25 uM KK4A之緩衝溶液中，25 nM至50 nM之HCV NS3蛋白酶。終DMSO濃度不超過2%體積/體積。藉著加入10%三氟乙酸(TFA)，產生2.5%之終TFA濃度，使該反應驟冷。藉著在逆相微量HPLC管柱(Phenomenex Jupiter 5微米C18 300 A管柱，150x2.0毫米)上分離受質和產物，評估酵素活性，使用恆溫管柱室將其加熱至40℃，使用帶有自動注射以及在210和280毫微米處之二極管陣列檢測的Agilent系列1100儀器。流速為0.2毫升/分鐘，利用H2O/0.1% TFA(溶劑A)和CH3CN/0.1% TFA(溶劑B)。使用直線梯度；在12分鐘內，5至60%溶劑B，然後在1分鐘內，60%至100%溶劑B，3分鐘等梯度，接著1分鐘到達5%溶劑B，並以10分鐘的公告時間結束，使用5%溶劑B的等梯度。使用在210毫微米處收集的數據，分析SMSY產物峰值，其通常具有10分鐘的停留時間。

    為了判定動力學參數Km和Vmax，NS5AB受質從3 μM改變至200 μM。產物高峰面積對反應時間的比例，產生酵素催化水解作用的速率。這些速率對受質濃度數據點，符合使用非-線性回歸的Michaelis-Menten方程式。使用票面蛋白酶濃度，並以完全切開的肽作為儀器刻度標準物，從Vmax中判定kcat的值。
    實例2在HPLC肽切開測定中的效力判定
    為了評估表觀的Ki值，在室溫下預先培養除了受試化合物和受質之外的所有組份5分鐘。然後將溶解於DMSO中的受試化合物加至該混合物中，並在室溫下培養15分鐘。藉著加入等於Km之濃度(11 μM至70 μM)的NS5AB肽，開始切開反應，並在30℃下培養15分鐘。使用七到八種濃度的化合物，滴定酵素的抑制活性。活性對抑制劑濃度數據點，符合描述使用非-線性回歸之競爭性牢固-結合酵素抑制作用的Morrison方程式[Sculley,M.J.和Morrison,J.F.,Biochim. Biophys. Acta. 874，第44-53頁(1986)]。
    實例3HCV NS3蛋白酶螢光肽測定
    使用由Taliani等人描述之測定[Taliani M.等人，Anal.Biochem.,240，第60-67頁(1997)]的修改，判定酵素活性。所有的反應均在含有50 mM HEPES pH7.8,100 mM NaCl,20%甘油,5 mM DTT和25 μm KK4A的緩衝溶液(緩衝溶液A)中進行，使用RET-S1螢光肽(AnaSpec,San Jose,CA)作為受質。將終DMSO濃度維持在1-2%(體積/體積)。除非另行提及，均以維持30℃恆溫的螢光微量滴定盤讀取器持續監視反應，分別具有355毫微米和495毫微米的激發和發射濾光器。
    為了判定動力學參數Km和Vmax，RET-S1受質在緩衝溶液中，從6 μM變化至200 μM，容許與5 nM到10 nM的HCV NS3蛋白酶反應5至10分鐘。藉著加入25微升10%三氟乙酸(TFA)使該反應驟冷。藉著在逆相微量HPLC管柱(Phenomenex Jupiter 5微米C18 300 A管柱，150x2.0毫米)上分離受質和產物，評估酵素活性，使用恆溫管柱室將其加熱至40℃，使用帶有自動注射以及在350毫微米處激發和在490毫微米處檢測之螢光檢測的Agilent系列1100儀器。流速為0.2毫升/分鐘，利用H2O/0.1% TFA(溶劑A)和CH3CN/0.1% TFA(溶劑B)。使用直線梯度；在30分鐘內，5至100%溶劑B，然後在2分鐘內，100%至5%溶劑B，並以10分鐘的公告時間結束，使用5%溶劑B的等梯度。活性對受質濃度數據點，符合使用非線性回歸的Michaelis-Menten方程式。使用票面蛋白酶濃度，並以完全切開的受質肽作為儀器刻度標準物，從Vmax中判定kcat的值。
    實例4利用延長培養的效力判定
    藉著在以VX-950延長預先培養之後，測定殘餘的酵素活性，判定VX-950和HCV NS3蛋白酶的抑制常數。在室溫下預先培養在緩衝溶液A中HCV NS3蛋白酶的母液10分鐘，然後轉移至30℃。將一等份的VX-950溶解於100% DMSO中，並在時間0時加至預先加熱的酵素母液中。在範圍從5到360分鐘的時間點，藉著將每等份5微升在緩衝溶液A中的RET-S1加至每等份95微升的酵素-抑制劑混合物中，產生4 μM RET-S1和5 nM至20 nM HCV NS3蛋白酶的終濃度，發動該反應。在150秒的視窗內監視螢光的變化，從螢光對時間數據點的線性回歸來判定反應速率。從含有純DMSO之反應來判定對照速率。使用七到八個濃度的化合物來滴定抑制作用的酵素活性。從活性對抑制劑濃度資料來計算IC50值，使用標準邏輯2參數吻合。在這些測定條件下，在延長培養之後HCV NS3蛋白酶之VX-950抑制作用的IC50等於牢固結合酵素/抑制劑複合物的抑制常數。
    實例5得自進行曲線分析的抑制作用特徵
    藉著由Narjes等人描述之測量進行曲線之方法[Narjes F.等人，Biochemistry 39，第1849-1861頁(2000)]的修改，判定緩慢結合之抑制作用開始的速率。在室溫下預先培養在緩衝溶液A中之HCV NS3蛋白酶的母液10分鐘，然後轉移至30℃，保持另外10分鐘。將感興趣的化合物溶解於100% DMSO中，加至在緩衝溶液A中的RET-S1溶液中。然後在30℃下培養化合物和受質10分鐘。藉著將一等份預先加熱的酵素母液加至化合物-受質混合物中，產生6至12 μM RET-S1和0.5 nM至4 nM HCV NS3蛋白酶之終濃度，發動該反應。監視螢光的改變高達4小時，並藉著非-線性回歸使螢光對時間數據點吻合方程式1[Morrison,J.F.和Walsh,C.T.,Adv. Enzymol. Relat. Areas Mol. Biol. 61，第201-301頁(1988)]。從含有純DMSO的反應中判定對照速率。
    方程式1：F(t)=Vs x t+(Vi-Vs)x(1-exp(-kobs x t))/kobs+C
    kobs值對VX-950濃度的重畫，容許藉著吻合方程式2，判定形成牢固結合之酵素/抑制劑複合物的二次恆定率(kon)，以及牢固結合之酵素/抑制劑複合物解離的一次恆定率(koff)。從koff/kon比例發現該物種的抑制常數[Morrison,J.F.和Walsh,C.T.,Adv. Enzymol. Relat. Areas Mol. Biol. 61，第201-301頁(1988)]。
    方程式2：kobs=koff+(kon x[I])/(1+[S]/Km)
    使用上文獲得的進行曲線，經由在延長反應時間之剩餘酵素活性的分析，判定HCV NS3蛋白酶之VX-950抑制的抑制常數。從在反應平穩狀態部分的期間，螢光對時間數據點的線性回歸，判定反應速率。活性對抑制劑濃度數據點，符合使用非線性回歸之描述競爭性牢固-結合酵素抑制的Morrison方程式[Sculley,M.J.和Morrison,J.F.,Biochim. Biophys. Acta. 874，第44-53頁(1986)]。
    實例6從酵素-抑制劑複合物中測量解離率
    在室溫下預先培養在緩衝溶液A中之HCV NS3蛋白酶的母液10分鐘，然後轉移至30℃，保持另外10分鐘。將感興趣的化合物溶解於100% DMSO中，加至預先-加熱的酵素母液中，產生330 nM至1600 nM之酵素和1.0 μM至6.4 μM之抑制劑。在30℃下培養該溶液延長的期間，容許酵素-抑制劑複合物達到平衡。藉著在30℃下，將酵素-抑制劑混合物稀釋至RET-S1在緩衝溶液A中的溶液內，發動該反應。終濃度為0.5 nM至8 nM HCV NS3蛋白酶，12 μM RET-S1和2 nM至32 nM抑制劑。監視螢光的改變高達4小時，並藉著非線性回歸使螢光對時間數據點符合方程式2。從含有純DMSO的反應中判定對照速率。使用方程式3判定牢固結合之VX-950/HCV NS3蛋白酶複合物的半衰期[Segel,I.H. Biochemical Calculations，第2版，Wiley & Sons: New York，第228頁(1976)]。
    方程式3：t1/2=0.693/koff
    實例7HCV複製子細胞測定草案
    根據Lohmann等人，Science,285，第110-113頁(1999)的方法獲得細胞。將含有C型肝炎病毒(HCV)複製子的細胞維持在含有10%胎牛血清(FBS)、每毫升0.25毫克之G418並適當補充的DMEM(培養基A)中。
    在第1天，以胰蛋白酶：EDTA混合物處理複製子細胞單層，移除，然後將培養基A稀釋成每毫升100,000個細胞的終濃度。將在100微升中之10,000個細胞放在96-孔組織培養盤的各孔中，並在37℃下在組織培養恆溫箱中培養過夜。
    在第2天，以含有2%FBS、0.5% DMSO並適當補充的DMEM(培養基B)連續稀釋化合物(在100% DMSO中)。在整個稀釋系列中，將DMSO的濃度維持在0.5%。
    移除在複製子細胞單層上的培養基，然後加入含有各種濃度之化合物的培養基B。在其他的孔中加入不含任何化合物的培養基B作為無化合物的對照組。
    在37℃下，在組織培養恆溫箱中培養細胞與在培養基B中的化合物或0.5% DMSO 48小時。在48小時的培養結束時，移除培養基，並以PBS沖洗複製子細胞單層一次，在萃取RNA之前，先儲存在-80℃下。
    融解裝有經過處理之複製子細胞單層的培養盤，並將固定量的其他RNA病毒，如牛病毒性下痢病毒(BVDV)加至每孔的細胞中。立刻在細胞中加入RNA萃取試劑(如得自RNeasy套組的試劑)，以避免RNA的降解。根據製造者的說明並加以修改，萃取總RNA，以便改善萃取效率和一致性。最後，洗脫總細胞RNA，包括HCV複製子RNA，並儲存在-80℃下，直到進一步處理為止。
    利用兩組特定的引子和探針，建立Taqman即時RT-PCR定量測定。一組是供HCV使用，而另一組是供BVDV使用。為了定量HCV和BVDV兩者，在相同的PCR孔中，將得自經過處理之HCV複製子細胞的總RBA萃取物加至PCR反應中。以在每孔中BVDV RNA的含量為基礎，將實驗的失敗插上棋子並剔除。根據在相同PCR盤中執行的標準曲線，計算在每孔中HCV RNA的量。使用DMSO或無化合物對照組作為0%的抑制作用，計算歸因於化合物處理的抑制或降低HCV RNA含量的百分比。從任何特定化合物的滴定曲線計算IC50(觀察到HCV RNA含量之50%抑制的濃度)。
    發現VX-950在該複製子測定中具有354 nM的IC50。 實例8基因型2a、2b、3a或3b之HCV NS3絲胺酸蛋白酶功能部位和NS4A輔因子肽的一致序列
    從GenBank中獲得涵蓋許多HCV分離株NS3絲胺酸蛋白酶功能部位和NS4A輔因子肽之cDNA片段的核苷酸序列，並使用DNAstar軟體將其排成一直線。這些基因型2分離株包括來自基因型2a的八個(GenBank登錄密碼P26660、AF177036、AB031663、D50409、AF169002、AF169003、AF238481、AF238482)，和來自基因型2b的三個(GenBank登錄密碼P26661、AF238486、AB030907)。在圖1中出示這11個基因型2 HCV NS3絲胺酸蛋白酶功能部位之胺基酸序列的排列。在圖2中出示基因型2a NS3絲胺酸蛋白酶功能部位的一致胺基酸和核苷酸序列。這些基因型3分離株包括來自基因型3a的四個(GenBank登錄密碼AF046866、D17763、D28917、X76918)和來自基因型3b的兩個(GenBank登錄密碼D49374和D63821)。在圖3中出示這六個基因型3 HCV NS3絲胺酸蛋白酶功能部位之胺基酸序列的排列。在圖4中出示基因型3a NS3絲胺酸蛋白酶功能部位的一致胺基酸和核苷酸序列。最後，在圖5中出示每個基因型或基因亞型1a、1b、2a、2b、3a和3b之一致胺基酸序列的排列。
    質體建構。從GenBank獲得編碼基因型2a或2b之數個分離株之殘基Ala1-Ser181的DNA片段之胺基酸和核苷酸序列，並排成一直線，確認基因型2a或2b NS3絲胺酸蛋白酶功能部位的一致序列。同樣應用在基因型3a或3b上，確認基因型3a或3b HCV NS3絲胺酸蛋白酶功能部位的一致序列。藉著寡核苷酸合成(Genscript)，使用大腸桿菌最佳密碼子利用，創造這些一致序列的cDNA片段，然後藉著PCR擴大，並繼代選殖到pBEV11內，以便在大腸桿菌中表現帶有C-終端六組胺酸標籤的HCV蛋白質。為了加溶變體，HCV NS3絲胺酸蛋白酶的胺基酸#13，以Lys取代Leu。藉著定序證實所有的構築體。
    HCV NS3絲胺酸蛋白酶功能部位的表現和純化。將基因型2a或3a之HCV NS3絲胺酸蛋白酶功能部位的表現構築體分別轉化到BL21/DE3 pLysS大腸桿菌細胞(Stratagene)內。在37℃下，使新近轉化的細胞生長在補充有100微克羧苄青黴素/每毫升和35微克氯黴素/每毫升的BHI培養基(Difco Laboratories)中，達到在600毫微米處0.75之光密度。在24℃下，進行利用1 mM IPTG之誘導4小時。藉著離心收集細胞淤漿，並在蛋白質純化之前先在-80℃下急速冷凍。所有的純化步驟均在4℃下進行。至於每個HCV NS3蛋白酶，將100克的細胞淤漿溶解於1.5公升緩衝溶液A[50 mM HEPES(pH8.0),300 mM NaCl,0.1%正-辛基-β-D-呋喃葡糖苷，5 mM β-巰基乙醇,10%(體積/體積)甘油]中，並攪拌30分鐘。使用微量流化器(Microfluidizer)(Microfluidics,Newton,MA)將溶胞產物均質化，接著以54,000xg超離心45分鐘。在上清液中加入咪唑，至5 mM之終濃度，連同預先以含有5 mM咪唑之緩衝溶液A平衡的2毫升Ni-NTA樹脂。搖動該混合物3小時，並以20份管柱體積的緩衝溶液A加5 mM咪唑沖洗。以含有300 mM咪唑的緩衝溶液A洗脫出HCV NS3蛋白質。濃縮該洗脫物，並裝入預先以緩衝溶液A平衡的Hi-Load 16/60 Superdex 200管柱中。收集經過純化之HCV蛋白質的適當溶離份，並儲存在-80℃下。 實例9
    已經判定HCV基因型的一致功能部位，在大腸桿菌中表現NS3絲胺酸蛋白酶功能部位蛋白質，並純化至均一。利用KK-4A肽(Landro等人，1997 Biochemistry)和FRET受質(Taliani等人，1997 Anal. Biochem.)進行VX-950的酵素測定。使用穩態方法判定VX-950的Ki*，並藉著兩個其他的方法證實(延長培養和進行曲線)。
    一致功能部位的分離，容許與HCV-2比較，判定VX-950與HCV-1之功能部位的結合特徵。本發明者顯示VX-950具有比已經由熟諳此藝者描述之其他抑制劑更好數倍的活性。由本發明者獲得的數據，顯示VX-950與NS3-4A絲胺酸蛋白酶的結合是可逆的、共價的、競爭性的、牢固且緩慢的結合。該製劑本身具有與其他目前正在發展之製劑不同的抑制作用機制。例如，見到其他製劑與蛋白酶結合，該結合是可逆的、非-共價的、競爭性且牢固的。更重要的是，判定基因型1的結合位置是在殘基78-80處的Val-Asp-Gln和胺基酸56，而在基因型2中的則是Ala-Glu-Gly。在那些殘基處的胺基酸差異，意味著與在HCV基因型1中環的穩定性相比較，出現在HCV基因型之絲胺酸蛋白酶中的環具有較低的構型穩定性。同時較低的構型穩定性減少了一些抑制劑的結合，預期該在構型穩定性上的降低，對VX-950的結合有較少的影響，使得該抑制劑成為得自基因型2 HCV之絲胺酸蛋白酶較有效的抑制劑。在基因型3 HCV中亦看到類似的結果，其中Gln取代了出現在基因型1 HCV中的Asp168。
    雖然已經描述了本發明許多的具體實施例，顯然可改變基本的實例，提供其他利用本發明之化合物和方法的具體實施例。因此，將知曉本發明之範圍是由附錄的申請專利範圍來定義，而非由藉著上文實例代表之特定具體實施例定義。所有提及的文獻均以引用的方式併入本文中。
    圖1十一個基因型2 HCV NS3絲胺酸蛋白酶功能部位之胺基酸序列的排列。
    圖2基因型2a NS3絲胺酸蛋白酶功能部位之一致胺基酸和核苷酸序列。
    圖3六個基因型3 HCV NS3絲胺酸蛋白酶功能部位之胺基酸序列的排列。
    圖4基因型3a NS3絲胺酸蛋白酶功能部位之一致胺基酸和核苷酸序列。
    圖5每個基因型或亞基因型1a、1b、2a、2b、3a和3b之一致胺基酸序列的排列。
    <110>　美商維泰克斯製藥公司
    <120>　C型肝炎病毒(HCV)NS3-NS4A蛋白酶抑制劑
    <130>　30852/40507
    <140>　094134425
    <141>　2005-09-30
    <150>　US 60/615,412
    <151>　2004-10-01
    <160>　28
    <170>　PatentIn version 3.3
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    <213>　人類細胞巨大病毒
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    <212>　蛋白質
    <213>　人類細胞巨大病毒
    <400>　21

    <210>　22
    <211>　181
    <212>　蛋白質
    <213>　人類細胞巨大病毒
    <400>　22

    <210>　23
    <211>　181
    <212>　蛋白質
    <213>　人類細胞巨大病毒
    <400>　23


    <210>　24
    <211>　181
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    <213>　人類細胞巨大病毒
    <400>　24


    <210>　25
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    <400>　25

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    <210>　27
    <211>　181
    <212>　蛋白質
    <213>　人類細胞巨大病毒
    <400>　27


    <210>　28
    <211>　181
    <212>　蛋白質
    <213>　人類細胞巨大病毒
    <220>
    <221>　misc_特徵
    <222>　(179)..(179)
    <223>　Xaa可以是任何天然存在的胺基酸
    <400>　28

    权利要求:
    Claims (21)
    [1] 一種抑制基因型-2 C型肝炎病毒(HCV)NS3-NS4A蛋白酶的方法，其包括使該蛋白酶與有效抑制該蛋白酶之活性的量之VX-950或其在藥學上可接受之鹽接觸。
    [2] 一種抑制HCV基因型-3 NS3-NS4A蛋白酶的方法，其包括使該蛋白酶與有效抑制該蛋白酶之活性的量之VX-950或其在藥學上可接受之鹽接觸。
    [3] 一種治療患者HCV基因型-2感染的方法，其包括對該患者投與VX-950或其在藥學上可接受的鹽。
    [4] 一種治療患者HCV基因型-3感染的方法，包括對該患者投與VX-950或其在藥學上可接受的鹽。
    [5] 如請求項3或4之方法，其包括對該患者進一步投與額外製劑之步驟，該製劑係選自免疫調節劑、細胞色素p450抑制劑、抗病毒製劑、第二HCV蛋白酶抑制劑、在HCV生命周期中之其他標靶的抑制劑、或其組合；其中該額外製劑係以與VX-950相同劑量形式的一部分，或以分開的劑量形式投與該患者。
    [6] 如請求項5之方法，其中該免疫調節劑為α-、β-或γ-干擾素或胸腺素；該抗病毒製劑為利巴韋林、金剛烷胺或汰比夫定；或該在HCV生命周期中之其他標靶的抑制劑為HCV解螺旋酶、聚合酶或金屬蛋白酶的抑制劑。
    [7] 如請求項5之方法，其中該細胞色素p-450抑制劑為利托納維。
    [8] 如請求項5之方法，其中該額外製劑為VX-497。
    [9] 如請求項5之方法，其中該額外製劑為干擾素。
    [10] 一種排除或降低生物試樣或醫學或實驗室設備之基因型-2或基因型-3 HCV污染的方法，其包括使該生物試樣或醫學或實驗室設備與VX-950接觸的步驟。
    [11] 如請求項10之方法，其中該試樣或設備係選自體液、生物組織、手術器械、手術服裝、實驗室儀器、實驗室服裝、血液或其他體液收集裝置；血液或其他體液儲存材料。
    [12] 如請求項11之方法，其中該體液為血液。
    [13] 一種用於抑制HCV基因型-2 NS3-NS4A蛋白酶的組合物，其包括i)有效抑制HCV基因型-2 NS3-NS4A蛋白酶的量之VX-950或其在藥學上可接受的鹽；以及ii)可接受之載劑、佐劑或媒劑。
    [14] 一種用於抑制HCV基因型-3 NS3-NS4A蛋白酶的組合物，其包括i)有效抑制HCV基因型-3 NS3-NS4A蛋白酶的量之VX-950或其在藥學上可接受的鹽；以及ii)可接受之載劑、佐劑或媒劑。
    [15] 如請求項13或14之組合物，其中該組合物係調配用於投與患者。
    [16] 如請求項15之組合物，其中該載劑、佐劑或媒劑是在藥學上可接受的載劑、佐劑或媒劑。
    [17] 如請求項16之組合物，其中該組合物包括額外製劑，該選自免疫調節劑、細胞色素p450抑制劑、抗病毒製劑、第二個HCV蛋白酶的抑制劑、在HCV生命周期中之其他標靶的抑制劑、細胞色素P-450抑制劑、或其組合。
    [18] 如請求項17之組合物，其中該免疫抑制劑為α-、β-或γ-干擾素或胸腺素；該抗病毒製劑為利巴韋林、金剛烷胺或汰比夫定；或該在HCV生命周期中之其他標靶的抑制劑為HCV解螺旋酶、聚合酶或金屬蛋白酶的抑制劑。
    [19] 如請求項17之組合物，其中該細胞色素P-450抑制劑為利托納維。
    [20] 如請求項17之組合物，其中該額外製劑為VX-497。
    [21] 如請求項17之組合物，其中該額外製劑為干擾素。
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    MXPA06004746A|2006-10-17|Hcv ns3-ns4a protease resistance mutants
    同族专利:
    公开号 | 公开日
    EP1804821A4|2009-07-15|
    NZ554351A|2010-02-26|
    US20080267915A1|2008-10-30|
    SG155967A1|2009-10-29|
    ZA200703484B|2008-09-25|
    EP1804821A2|2007-07-11|
    SG191661A1|2013-07-31|
    RU2010135497A|2012-02-27|
    CN102160891A|2011-08-24|
    JP2012102098A|2012-05-31|
    CN101072575A|2007-11-14|
    KR20130083938A|2013-07-23|
    IL182339D0|2007-07-24|
    JP2014237664A|2014-12-18|
    JP2008514723A|2008-05-08|
    MX2007003812A|2007-05-24|
    AU2005291918A1|2006-04-13|
    NO20072286L|2007-05-02|
    RU2007116265A|2008-11-10|
    EP2374464A3|2011-10-26|
    CA2583472A1|2006-04-13|
    WO2006039488A2|2006-04-13|
    WO2006039488A3|2007-02-22|
    BRPI0516825A|2008-09-23|
    EP2374464A2|2011-10-12|
    TW200621233A|2006-07-01|
    US20110059886A1|2011-03-10|
    KR20070061570A|2007-06-13|
    引用文献:
    公开号 | 申请日 | 公开日 | 申请人 | 专利标题
    US4001A||1845-04-16||Carriage- wheel |
    US4835168A|1985-12-16|1989-05-30|Eli Lilly And Company|Thiadiazole antiviral agents|
    AT417836T|1992-12-29|2009-01-15|Abbott Lab|Verfahren und intermediate zur herstellung von retroviralen proteasehemmern|
    IL110752A|1993-09-13|2000-07-26|Abbott Lab|Liquid semi-solid or solid pharmaceutical composition for an HIV protease inhibitor|
    US5559158A|1993-10-01|1996-09-24|Abbott Laboratories|Pharmaceutical composition|
    IL111991A|1994-01-28|2000-07-26|Abbott Lab|Liquid pharmaceutical composition of HIV protease inhibitors in organic solvent|
    US6037157A|1995-06-29|2000-03-14|Abbott Laboratories|Method for improving pharmacokinetics|
    US5807876A|1996-04-23|1998-09-15|Vertex Pharmaceuticals Incorporated|Inhibitors of IMPDH enzyme|
    US6054472A|1996-04-23|2000-04-25|Vertex Pharmaceuticals, Incorporated|Inhibitors of IMPDH enzyme|
    CN1515248A|1996-04-23|2004-07-28|沃泰克斯药物股份有限公司|用作肌苷-5'-一磷酸脱氢酶抑制剂的脲衍生物|
    US6127422A|1996-05-06|2000-10-03|Eli Lilly And Company|Anti-viral method|
    US5990276A|1996-05-10|1999-11-23|Schering Corporation|Synthetic inhibitors of hepatitis C virus NS3 protease|
    AU2933797A|1996-05-10|1997-12-05|Schering Corporation|Synthetic inhibitors of hepatitis c virus ns3 protease|
    EE04023B1|1996-10-18|2003-04-15|Vertex Pharmaceuticals Incorporated|Seriinproteaaside, eriti C-hepatiidi viiruse NS3-proteaasi inhibiitorid|
    ES2201452T3|1997-03-14|2004-03-16|Vertex Pharmaceuticals Incorporated|Inhibidores de la enzima impdh.|
    GB9707659D0|1997-04-16|1997-06-04|Peptide Therapeutics Ltd|Hepatitis C NS3 Protease inhibitors|
    IL134233D0|1997-08-11|2001-04-30|Boehringer Ingelheim Ca Ltd|Hepatitis c inhibitor peptide analogues|
    DK1003775T3|1997-08-11|2005-05-30|Boehringer Ingelheim Ca Ltd|Hepatitis C-inhibitorpeptider|
    US20040058982A1|1999-02-17|2004-03-25|Bioavailability System, Llc|Pharmaceutical compositions|
    DE69934104T2|1998-03-31|2007-06-28|Vertex Pharmaceuticals Inc., Cambridge|Inhibitoren von serinproteasen, insbesondere von hepatitis c virus ns3 protease|
    GB9812523D0|1998-06-10|1998-08-05|Angeletti P Ist Richerche Bio|Peptide inhibitors of hepatitis c virus ns3 protease|
    FR2779653B1|1998-06-11|2002-12-20|Inst Nat Sante Rech Med|Utilisation de composes modulateurs du proteasome en therapie|
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    AR029341A1|1999-03-19|2003-06-25|Vertex Pharma|Inhibidores de la enzima impdh |
    IL153670D0|2000-07-21|2003-07-06|Schering Corp|Novel peptides as ns3-serine protease inhibitors of hepatitis c virus|
    SV2003000617A|2000-08-31|2003-01-13|Lilly Co Eli|Inhibidores de la proteasa peptidomimetica ref. x-14912m|
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    US7098231B2|2003-01-22|2006-08-29|Boehringer Ingelheim International Gmbh|Viral polymerase inhibitors|
    US7223785B2|2003-01-22|2007-05-29|Boehringer Ingelheim International Gmbh|Viral polymerase inhibitors|
    WO2004073599A2|2003-02-18|2004-09-02|Pfizer Inc.|Inhibitors of hepatitis c virus, compositions and treatments using the same|
    EP1601685A1|2003-03-05|2005-12-07|Boehringer Ingelheim International GmbH|Hepatitis c inhibiting compounds|
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    US6933760B2|2003-09-19|2005-08-23|Intel Corporation|Reference voltage generator for hysteresis circuit|
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    AT495185T|2004-01-21|2011-01-15|Boehringer Ingelheim Int|Makrocyclische peptide mit wirkung gegen das hepatitis-c-virus|
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    TW201139438A|2010-03-24|2011-11-16|Vertex Pharma|Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections|
    WO2011156545A1|2010-06-09|2011-12-15|Vertex Pharmaceuticals Incorporated|Viral dynamic model for hcv combination therapy|
    WO2011159826A2|2010-06-15|2011-12-22|Vertex Pharmaceuticals Incorporated|Hcv ns5b protease mutants|
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    AU2011276526A1|2010-06-28|2013-01-10|Vertex Pharmaceuticals Incorporated|Compounds and methods for the treatment or prevention of Flavivirus infections|
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    AR087346A1|2011-07-26|2014-03-19|Vertex Pharma|Formulaciones de compuestos de tiofeno|
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    US8466159B2|2011-10-21|2013-06-18|Abbvie Inc.|Methods for treating HCV|
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    UY34401A|2011-10-21|2013-05-31|Abbvie Inc|Métodos para el tratamiento de hcv|
    US9012427B2|2012-03-22|2015-04-21|Alios Biopharma, Inc.|Pharmaceutical combinations comprising a thionucleotide analog|
    JP5924587B2|2012-09-18|2016-05-25|国立大学法人 鹿児島大学|血中ｈｃｖ検出方法及び抗ｈｃｖ治療の効果判定方法|
    US20150065439A1|2013-02-28|2015-03-05|Vertex Pharmaceuticals Incorporated|Pharmaceutical compositions|
    EP2899207A1|2014-01-28|2015-07-29|Amikana.Biologics|New method for testing HCV protease inhibition|
    CA3022119A1|2016-04-28|2017-11-02|Emory University|Alkyne containing nucleotide and nucleoside therapeutic compositions and uses related thereto|
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    法律状态:
    优先权:
    申请号 | 申请日 | 专利标题
    US61541204P| true| 2004-10-01|2004-10-01||
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